Protocole de Fixation d’échantillons (Paraformaldéhyde 2%)

lundi 8 décembre 2008
par  Aude BARANI

Une des possibilité pour conserver un échantillons est de le fixer au PFA avant de le congeler.
Cette fixation est compatible avec l’analyse ulterieure en cytométrie en flux

Preparation de 100 ml de Solution mère à 20% (200 échantillons environ)

 !!!!PRODUIT TOXIQUE – A MANIPULER SOUS HOTTE + GANTS + MASQUE

1) Dissoudre 20 g de PFA en poudre dans 100 ml d’eau bidistillée ou ultra pure

Hydratation 2 - 3 minutes

Agitation 5 minutes

2) Chauffer 30 - 60 minutes dans une étuve (80-90°C) ou 30 minutes sur une plaque chauffante (ATTENTION : éviter l’ébullition)

3) Ajouter quelques gouttes de NaOH 1N la solution devient limpide

Laisser refroidir

Filtrer sur 0,2 microM avec seringue (ATTENTION risques d’éclaboussures

Conservation : 1 mois à 4°C

Ajouter 10% (V/V) de la solution mère aux échantillons pour une fixation à 1 à 2% final. Attendre environ 10 minutes, à l’obscurité, avant la congélation.

La congélation idéale est l’azote liquide. Ensuite les échantillons peuvent être stockés jusqu’au jour de l’analyse soit dans l’azote liquide, soit dans un congélateur -80°C. La conservation peut durer plusieurs mois, mais il est recommandé de ne pas dépasser l’année.